PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。
PCR儀/基因擴(kuò)增儀實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR儀/基因擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀.
PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增,加熱使雙鏈DNA解開螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過程至25~40個循環(huán),呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。
PCR擴(kuò)增時加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記,使引物和熒光探針同時與模板進(jìn)行特異性結(jié)合,擴(kuò)增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng),實時輸出量化結(jié)果,這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。
PCR儀/基因擴(kuò)增儀的操作非常簡便,接通電源,儀器自檢,設(shè)置溫度程序或調(diào)出儲存的程序運(yùn)行即可。